ИНСТРУКЦИЯ ПО ОПРЕДЕЛЕНИЮ ВИТАМИНА C В ПИЩЕВЫХ ПРОДУКТАХ
Разработана в Институте питания АМН СССР лабораторией витаминизации пищевых продуктов.
Метод визуального титрования витамина С является наиболее простым, доступным и широко используется как в нашей стране, так и за рубежом для определения этого витамина в пищевых продуктах, не содержащих естественных пигментов, мешающих визуальному установлению конца титрования.
Метод прошел широкую апробацию в различных лабораториях научных и практических учреждений (лаборатории пищевых отделов СЭС, кафедр гигиены питания медицинских институтов, лабораторий различных отраслей пищевой промышленности), одобрен Минздравом СССР и рекомендован для практического использования Междуведомственной комиссией по составлению «Таблиц химического состава пищевых продуктов».
Принцип метода
Метод основан на способности аскорбиновой кислоты (АК) окисляясь количественно восстанавливать 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия. АК экстрагируют раствором метафосфорной кислоты и титруют 2,6-дихлорфенолиндофенолятом натрия до установления светло-розовой окраски. Дегидроаскорбиновую кислоту в АК восстанавливают цистеином, для отделения АК от редуцирующих соединений, присутствующих в пищевых продуктах, подвергающихся тепловой обработке и длительно хранившихся, экстракты обрабатывают формальдегидом при определении pH.
Оборудование
Потенциометр; термостат водяной на 37 °С; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 200 г, поверочной ценой деления не более 0,5 мг; весы лабораторные общего назначения с наибольшим пределом взвешивания 500 г, поверочной ценой деления не более 50 мг; гомогенизатор.
Посуда
Ступка с пестиком; воронки фильтровальные диаметром 5 — 7,5 см; колбы мерные вместимостью 100, 500 и 1000 куб. см; колбы конические вместимостью 50 и 100 куб. см; микробюретки на 2 куб. см с ценой деления 0,01 куб. см; пипетки градуированные на 1, 2, 5 и 10 куб. см; цилиндры мерные на 100 и 200 куб. см; стаканы на 50 и 100 куб. см.
Реактивы
1. Аскорбиновая кислота (Госфармакопея СССР, X изд., ст. 6).
2. 2,6-дихлорфенолиндофенолят натрия.
3. Калий фосфорнокислый двузамещенный.
4. Метафосфорная кислота.
5. Натрий уксуснокислый.
6. Серная кислота, ос.ч.
7. Уксусная кислота ледяная.
9. Формальдегид 36 — 38%.
10. Этилендиаминтетрауксусная кислота.
11. Бумага фильтровальная.
Приготовление реактивов
1. Раствор метафосфорной кислоты 6% и 3%. Растирают в ступке 60 г HPO
и растворяют в 940 куб. см дистиллированной воды без нагревания. При
стоянии раствор HPO медленно гидролизуется до H PO , поэтому свежий
раствор готовят еженедельно. 3% раствор HPO готовят в день проведения
анализа из 6% раствора. 3
2. Стандартные растворы аскорбиновой кислоты (АК) с массовой концентрацией 1 мг/куб. см и 0,1 мг/куб. см. Растворяют 0,1000 г АК в мерной колбе на 100 куб. см в 3% растворе метафосфорной кислоты и доводят тем же раствором кислоты до метки (раствор с массовой концентрацией 1 мг/куб. см). Для приготовления раствора 0,1 мг/куб. см 10 куб. см раствора АК с концентрацией 1 мг/куб. см вносят в мерную колбу вместимостью 100 куб. см и доводят до метки 3% раствором метафосфорной кислоты. Растворы неустойчивы, их приготовляют непосредственно перед применением.
3. Раствор 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия 0,04%. Растворяют 0,2 г 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в 300 куб. см горячей свежекипяченой (в течение 30 мин.) дистиллированной воды, фильтруют через складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 500 куб. см и промывают фильтр горячей водой. После охлаждения раствор доводят до метки охлажденной свежекипяченой дистиллированной водой. Срок годности раствора при хранении в холодильнике — не более 2 дней.
Установка титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия: в две конические колбы наливают по 9 куб. см 3% раствора метафосфорной кислоты и по 1 куб. см раствора АК с массовой долей 0,1 мг/куб. см и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия до светло-розовой окраски, не исчезающей в течение 10 — 15 с. Таким же образом титруют 10 куб. см 3% раствора метафосфорной кислоты (контроль на реактивы). Поправку к титру раствора вычисляют по формуле:
0,10 — количество АК в 1,0 куб. см стандартного раствора, мг;
V — объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, затраченный на
титрование стандартного раствора АК, куб. см;
V — объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, затраченный на титрование 3%
раствора метафосфорной кислоты, куб. см.
4. Раствор L-цистеина HCl с массовой концентрацией 50 мг/куб. см. Раствор приготовляют в день применения.
5. Ацетатный буфер (рН — 4,0). Растворяют 49,8 г уксуснокислого натрия в 70 куб. см дистиллированной воды и, добавляя ледяную уксусную кислоту (около 100 куб. см), потенциометрически доводят рН до 4,0.
6. Раствор серной кислоты: к 50 куб. см дистиллированной воды осторожно добавляют 50 куб. см концентрированной серной кислоты.
7. Раствор этилендиаминтетрауксусной кислоты (ЭДТА) с массовой концентрацией 15%.
8. Раствор двузамещенного фосфорнокислого калия с массовой концентрацией 45%.
Ход определения
Интервал определяемых концентраций АК составляет 0,05 — 0,12 мг в объеме экстракта (от 1,0 до 10 куб. см), взятого на титрование. Величину навески продукта и последующее разведение рассчитывают исходя из интервала указанных концентраций.
Навеску исследуемого материала, взятую из средней пробы (1 — 50 г в
зависимости от предполагаемого количества витамина С), помещают в
фарфоровый стакан, в который налито 30 — 50 куб. см 6% HPO , и
гомогенизируют полученный гомогенат, включая мякоть, количественно
переносят в мерную колбу или цилиндр вместимостью 100 — 200 куб. см,
доводят до метки 3% HPO , перемешивают и фильтруют через фильтровальную
бумагу. При анализе сухих продуктов гомогенат после измельчения настаивают
в течение 10 — 15 мин. При определении витамина С в жидких объектах
необходимое количество материала отсеивают или отмеряют в мерную колбу
вместимостью 100 куб. см и доводят до метки 3% HPO .
Экстрагирование проводят быстро, полученные экстракты сразу используют
При экстрагировании АК из продуктов, расфасованных в металлическую
тару, или из продуктов с высоким содержанием железа, навеску образца (1 —
25 г) гомогенизируют в 6% раствора HPO , переносят в цилиндр вместимостью
100 куб. см, этим же раствором кислоты и доводят объем до 50 куб. см,
перемешивают. Через 10 мин. прибавляют 30 куб. см ацетатного буферного
раствора и 10 куб. см раствора ЭДТА, доводят до метки 3% раствором HPO ,
перемешивают и фильтруют.
В две конические колбы вносят пипеткой от 1 до 10 куб. см экстракта,
доводят объем 3% раствором HPO до 10 куб. см и титруют раствором 2,6-
дихлорфенолиндофенола до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в
течение 10 — 15 с. Таким же образом титруют 10 куб. см 3% раствора HPO
(контроль на реактивы — V ).
При содержании в продукте редуцирующих соединений контрольное испытание
проводят следующим образом: в коническую колбу помещают такой же объем
экстракта, как при определении АК, прибавляют равный ему объем ацетатного
буфера и раствор формальдегида в объеме, равном половине объема буферного
раствора, перемешивают, закрывают колбу пробкой, оставляют на 10 мин. и
титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола (V ).
Массовую долю АК в мг на 100 г продукта вычисляют по формуле:
Т х (V — V ) х V х 100
Т — титр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола;
V — объем 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованного на титрование
испытуемого раствора (среднее из двух параллельных определений), куб. см;
V — объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, израсходованного на
титрование при контрольном испытании, куб. см;
V — общий объем экстракта, полученный при экстрагировании пробы, куб.
V — объем экстракта, взятый на титрование, куб. см;
а — масса навески, г;
100 — пересчет на 100 г продукта.
Вычисление проводят до первого десятичного знака. За конечный результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 5% от среднего арифметического значения.
Определение общего содержания витамина С (аскорбиновая
кислота + дегидроаскорбиновая кислота) (АК + ДАК)
В коническую колбу наливают 2 — 20 куб. см экстракта (для
проведения двух параллельных определений) (V ), доводят pH до 7,2 — 7,4
(потенциометрически) 45% раствором двузамещенного фосфорнокислого
калия, добавляют раствор цистеина в таком количестве, чтобы его
массовая концентрация приблизительно в 300 раз превышала предполагаемое
содержание ДАК, и ставят колбу в термостат при температуре 37 °С на 30
мин. Массовую долю цистеина в мг, добавляемую к экстракту, рассчитывают
К х а х V х 300 К х а х V х 3
К — массовая концентрация АК в продукте, определенная по формуле (1),
мг на 100 г продукта;
V — объем экстракта, взятый на восстановление ДАК в АК, куб. см;
остальные обозначения те же, что в формуле (1).
После термостатирования раствор быстро охлаждают до комнатной
температуры, доводят потенциометрически рН раствора до 0 — 0,5 раствором
серной кислоты и измеряют объем (V ). К части раствора (с примерной
массовой концентрацией АК 0,1 мг) (V ) прибавляют формальдегид до
получения массовой доли 3%, закрывают колбу пробкой и через 8 мин.
титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола до слабо-розового окрашивания,
не исчезающего в течение 10 — 15 с.
Массовую долю витамина С в мг на 100 г продукта вычисляют по формуле:
Т х V х V х V х 100
V — объем раствора после доведения рН до 0 — 0,5, куб. см;
остальные обозначения те же, что в формулах (1) и (2).
Вычисление проводят до первого десятичного знака. За результат принимают среднее арифметическое двух параллельных определений. Расхождение между двумя параллельными определениями не должно превышать 8% от среднего арифметического значения.
Ассоциация содействует в оказании услуги в продаже лесоматериалов: покупка горбыль по выгодным ценам на постоянной основе. Лесопродукция отличного качества.
Источник
Лабораторная работа № 4 Количественное определение витамина с в молоке
Молоко содержит практически все витамины, необходимые для нормального развития человека. Они попадают в молоко с кормами и синтезируются микрофлорой рубца. Содержание витаминов в молоке колеблется в зависимости от сезона, стадии лактации, рациона кормления коров и их индивидуальных особенностей. При хранении и тепловой обработке молока содержание некоторых витаминов может уменьшаться на 30-70%.
Витамин С в молоке содержится главным образом в виде аскорбановой кислоты (67-78%) и небольшая часть – в виде дегидроаскорбиновой кислоты (22-33%).
Известно, что основными источниками витамина С служат растения. Особенно много аскорбиновой кислоты в перце, хрене, ягодах рябины, черной смородине, лимонах, шиповнике, молоке и молозиве. Нужно отметить, что аскорбиновая кислота — -лактон кетогулоновой кислоты – ненасыщенное соединение и не содержит карбоксильной группы. Аскорбиновая кислота способна к обратимому окислению с образованием дегидроаскорбиновой кислоты:
Аскорбиновая кислота Дегидроаскорбиновая кислота
Сущность метода заключается в титровании специально подготовленного экстракта индикатором 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола, 1 мл которого соответствует 0,088 мг аскорбиновой кислоты.
кислота синего цвета (хиноидная структура)
кислота лейкоформа (гидрохиноидная структура)
Цель работы: Ознакомление с методом количественного определения витамина С в молоке.
Оборудование: 1) мерные колбы на 50 и 100 мл;
2) микробюретка для титрования на 5 мл (или пипетка);
3) конические колбы на 50 мл;
4) пипетки на 1, 2, 5 и 10 мл.
Реактивы: 1) 2%-ный раствор НCl,
2) 0,001 н раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола,
4) дистиллированная вода.
Порядок выполнения работы
7.1 Определение титра раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия
Приготовление стандартного раствора аскорбиновой кислоты с концентрацией 1 г/л.
0,1000 г аскорбиновой кислоты растворяют в мерной колбе на 100 мл в 2%-ном растворе HCl, доводят объем колбы до метки этим же раствором.
Приготовление рабочего раствора аскорбиновой кислоты с концентрацией 0,1 г/л
10 мл стандартного раствора аскорбиновой кислоты (1 г/л) вносят в мерную колбу на 100 мл, доводят объем до метки 2%-ным раствором HCl и перемешивают. Растворы аскорбиновой кислоты неустойчивы, поэтому их готовят перед проведением испытания.
Приготовление раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия и определение его титра
0,08 г 2,6-дихлорфенолята натрия растворяют приблизительно в 150 мл горячей, предварительно прокипяченной в течение 30 мин и содержащей 0,04 г углекислого натрия, охлаждают до комнатной температуры, доводят объем до 200 мл той же охлажденной водой, перемешивают и фильтруют в темную склянку. Раствор хранят в холодильнике не более 10 дней.
Титр устанавливают по рабочему раствору (0,1 г/л) в день проведения испытания.
В колбу для титрования вносят пипеткой 1 мл рабочего раствора аскорбиновой кислоты, 9 мл дистиллированной воды и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия до светло-розовой окраски, не исчезающей в течение 15-20 с.
Одновременно проводят контрольное испытание. Для этого в колбу для титрования вносят 1 мл 2%-ного раствора HCl, 9 мл дистиллированной воды и быстро титруют раствором 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия.
Титр раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия в мг аскорбиновой кислоты, эквивалентного 1 мл раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, вычисляют по формуле:
,
где m – масса аскорбиновой кислоты, содержащейся в 1 мл рабочего раствора, мг;
V1 – объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на титрование рабочего раствора аскорбиновой кислоты, мл;
V2 – объем раствора 2,6-дихлорфенолиндофенолята натрия, израсходованный на контрольное испытание, мл.
Титриметрическое определение аскорбиновой кислоты
В коническую колбу на 50 мл отмерить пипеткой 5 мл молока и 10 мл дистиллированной воды, смесь размешать.
В колбу на 50 мл отмерить пипеткой 5 мл смеси, 9 мл дистиллированной воды и 1 мл 2%-ного раствора HCl, тщательно перемешать и оттитровать из микробюретки 0,001 н раствором 2,6-дихлорфенолиндофенола (добавляя его по каплям) до слабо-розового окрашивания, не исчезающего в течение 30-60 секунд.
Рассчитать содержание витамина С в молоке по формуле:
где С – содержание витамина С (мг/л);
а – количество 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола;
К – поправка к титру индикатора;
52,8 – постоянный коэффициент.
Пример расчетов. На титрование ушло 0,4 мл 0,001 н раствора 2,6-дихлорфенолиндофенола, поправка на титр 1,33.
Источник